分析评价国产吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质情况及存在问题，为品质衡量准则的提高、完善提供依据。

　　采用高效液相色谱( HPLC) 法，对本次抽验的106 批次吲哚美辛胶囊、34 批次吲哚美辛缓释胶囊及吲哚美辛原料进行有关物质测定，通过ADMET 性质预测软件预测各杂质毒性，结合统计分析结果对国产吲哚美辛胶囊、缓释胶囊有关物质结果做多元化的分析评价。

　　建立了HPLC 法测定吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质的方法，ADMET 性质预测软件预测结果提示，吲哚美辛各杂质毒副作用较大，分析评价结果提示国产吲哚美辛胶囊和缓释胶囊现行标准的有关物质方法有待提高。

　　吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质的风险比较大，考虑本品的不良反应较多及各杂质的毒性预测结果，各生产企业应格外的重视与产品质量紧密关联的所有的环节，确定保证产品质量的稳定，保障用药安全。

　　吲哚美辛胶囊; 吲哚美辛缓释胶囊; 有关物质; 高效液相色谱; ADMET

　　吲哚美辛( indometacin，消炎痛) 由美国默克( Merck) 公司于1963 年合成［1］，是非甾体抗炎镇痛药，为前列腺素合成酶之一［2-3］。

　　吲哚美辛具有解热镇痛及消炎作用，临床上大范围的使用在急性风湿性关节炎、类风湿关节炎、骨关节炎及其他炎症的治疗［4-5］。

　　吲哚美辛胶囊和缓释胶囊是我所2018 年承担的国家药品抽验品种，吲哚美辛胶囊全国范围内共有105 家生产企业，109 个批准文号，此次抽样共抽到106 批次样品，涉及10 家生产企业( 10 个批准文号) ，规格均为25 mg;

　　吲哚美辛缓释胶囊全国范围内共有4 家生产企业，4个批准文号，此次抽样共抽到34 批次样品，涉及1 家生产企业( 1 个批准文号) ，规格均为75 mg。

　　吲哚美辛胶囊和缓释胶囊现行品质衡量准则均为《中华人民共和国药典》2015 年版二部［6］，吲哚美辛胶囊国外药典收载的有《日本药典》2016 年版［7］、《英国药典》2018 年版［8］、《美国药典》41 版( USP41) ［9］、《巴西药典》2010 年版［10］; 吲哚美辛缓释胶囊未查询到国外药典的收载情况。

　　吲哚美辛胶囊和缓释胶囊《中华人民共和国药典》2015 年版二部有关物质项采用高效液相色谱( HPLC) 法，但吲哚美辛胶囊只对总杂质进行了控制( 总杂质不得过2.0%);吲哚美辛缓释胶囊对总杂质( 总杂质不得过1.0%) 和单杂质来控制( 不得过0.5%) 。

　　吲哚美辛胶囊有关物质项控制最严的标准目前是USP 41，规定杂质A 不得过0.20%，杂质B 不得过0.20%，其他单个杂质不得过0.20%，总杂质不得过1.0%。

　　虽然我国吲哚美辛胶囊和缓释胶囊的现行品质衡量准则比较完善，但有关物质项相对USP 41 过于宽松。

　　通过贵州省不良反应中心查询的报告、各生产企业调研反馈的情况及相关的文献报道可知，吲哚美辛毒副作用较大［11-12］，本次研究采用HPLC 法对吲哚美辛胶囊和缓释胶囊杂质进行研究，通过ADMET性质预测软件，对本次研究过程中样品检测出的吲哚美辛杂质A，B，G，H，I 和J( 化学结构式见图1) 进行毒理性质参数的全面预测。

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　　吲哚美辛对照品( 批号: 10，纯度99.9%)、吲哚美辛杂质A 对照品( 批号: 10，纯度: 100.0%)、吲哚美辛杂质B 对照品( 批号: 10，纯度: 100.0%，中国食品药品检定研究院);

　　吲哚美辛缓释胶囊样品来源于D 企业34 批次; 吲哚美辛胶囊来源于10 个厂家106批次样品( E，F，G，H，I，J，K，L，M 和N 企业样品分别为13，9，37，1，2，4，5，27，5和3 批次) 。

　　乙腈( 色谱纯)、甲醇( 色谱纯，Tedia Company，Inc.);水为超纯水; 磷酸二氢钾、磷酸、甲酸( 分析纯，市售) 。

　　精密称取本品细粉适量( 相当于吲哚美辛20 mg) ，置于50 mL 量瓶中，加乙腈适量，超声使溶解，用乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

　　采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 以乙腈为流动相A，0 .005 mol·L-1磷酸二氢钾溶液( 用磷酸调节pH 值至2.5) 为流动相B，按表1 进行梯度洗脱; 检测波长为238 nm; 进样量20 μL 作为色谱条件1，外标法计算吲哚美辛杂质A，B，C，D，F，G，H，I和J 的含量。

　　但杂质E 和吲哚美辛主峰不能有效分离，杂质E 和吲哚美辛为同分异构体，只是氯苯甲酰基的位置不一样，杂质E 为3 号位，而吲哚美辛在4 号位。

　　样品处理同上，采用HPLC法，以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水( 磷酸调节pH 值至2.5，35:65) 为流动相; 检测波长为238 nm，进样量20 μL 作为色谱条件2 测定杂质E。

　　杂质E 和吲哚美辛主峰能有效分离，空白溶剂及辅料无干扰。色谱条件1 和色谱条件2 均完成相应的方法学验证项目，通过验证该方法简单、准确、可靠，可用于吲哚美辛原料、胶囊和缓释胶囊的有关物质测定，典型HPLC 色谱图见图2。

　　按上述方法对本次抽验的106 批次吲哚美辛胶囊、34 批次的吲哚美辛缓释胶囊和3 个原料生产厂商生产的原料进行有关物质分析，各杂质的量均按外标法计算相当于吲哚美辛标示量的百分含量，因样品批次多，故结果均按照各企业均值进行汇总，各批次样品均未检出杂质C，D，E 和F，其余杂质检出情况见表2。

　　以甲醇-水( 用甲酸调pH 至2.5，50∶ 50) 为流动相，流速0.3 mL·min-1，分别将吲哚美辛杂质A，B，G，H，I 和J 对照品溶液及各厂家样品溶液各3 μL 注入3200QTＲAP 液相色谱质谱联用仪，根据获得的各对照品精确相对分子质量、母离子及子离子信息、色谱保留时间对本次研究样品中检测出的吲哚美辛杂质A，B，G，H，I 和J 进行定性分析，结果样品中所能检测出的吲哚美辛杂质A，B，G，H，I 和J，均经过质谱确认与对照品一致。

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　　结果杂质J 的毒性风险最大，会对人hEＲG 钾离子通道产生抑制而产生心脏毒性; 会引起碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、乳酸脱氢酶、血清谷丙转氨酶和血清谷草转氨酶水平升高而产生肝毒性; 有产生大鼠的急性毒性风险; 可能有皮肤和呼吸过敏性; 有黑头呆鱼急性毒性，产生一定的环境毒性; 可能会引起培养的哺乳动物细胞染色体变异，有一定的基因毒性; 可能会产生磷脂质病; 产生生殖毒性的可能性很大。

　　杂质A 有产生肝毒性风险; 有生物降解毒性，可能会产生一定的环境毒性; 可能会引起培养的哺乳动物细胞染色体变异，有一定的基因毒性。

　　杂质B 有产生大鼠的急性毒性风险; 可能与大鼠雌激素受体结合而产生毒性; 可能会产生一定的环境毒性。

　　杂质H 可能与大鼠雄激素受体结合而产生毒性; 可能有皮肤和呼吸过敏性; 有黑头呆鱼急性毒性，产生一定的环境毒性; 产生生殖毒性的可能性很大。

　　杂质I 可能与大鼠雄激素受体结合而产生毒性; 可能有呼吸过敏性; 有黑头呆鱼急性毒性，产生一定的环境毒性; 产生生殖毒性的可能性很大。

　　采用SPSS 软件对吲哚美辛胶囊和缓释胶囊各杂质分别进行有关分析，结果各杂质之间基本呈显著的正相关，杂质I 和杂质J 均呈极显著的正相关。

　　将按《中华人民共和国药典》2015 年版二部检验的有关物质结果( 总杂质) 与上述色谱条件1 检验所得有关物质结果进行配对样品的t 检验，结果发现吲哚美辛胶囊和缓释胶囊2 种方法的检定结果之间有极显著差异( P ＜ 0.01) 。

　　按照《中华人民共和国药典》2015 年版二部检验吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质总杂质均值分别为0.259%和0.391%，色谱条件1 测定的有关物质总杂质均值分别为0.439%和0.460%。

　　可见，按《中华人民共和国药典》2015 年版二部检验的有关物质结果偏低，分析原因可能为: 色谱条件1 采用的是梯度洗脱，洗脱时间为70 min( 相当于主峰保留时间的4.2 倍) ，各杂质分离情况较好，杂质检出量较多;

　　《中华人民共和国药典》2015 年版二部是等度洗脱，洗脱时间是主峰保留时间的3 倍，杂质检出量相对少一些，各杂质分离情况不及色谱条件1;

　　本次研究用样品是在按标准检验完成后1 ～ 4 个月后进行的，可能会出现有关物质稍有增加的可能。

　　根据对吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质的分析情况，结合各杂质间的相关分析情况，以及各杂质毒性预测和评价，杂质J 的毒性风险最大，杂质J 与杂质I 呈极显著的正相关，即经过控制检出量最大的杂质I 可以对杂质J 来控制，杂质I 也有一定的毒性风险，同时杂质A 表现出极大的肝毒性风险，杂质B 也表现出较大急性毒性风险，因此建议参照USP 41 对杂质A 和杂质B 来控制，同时增加对杂质I 的控制，从而控制毒性风险极大且与其呈极显著相关性的杂质J 所带来的毒性风险，确保用药的安全性。

　　杂质G 虽表现出较大的急性毒性风险，但检出率很低，本次抽检的140 批次样品，只有4 批次检出杂质G，且检出量均较低，所以不对其进行单独控制。

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　　本次研究建议将吲哚美辛胶囊和吲哚美辛缓释胶囊《中华人民共和国药典》2015 年版二部有关物质项完善提高为: 精密称取本品细粉适量( 约相当于吲哚美辛20 mg) ，置于50 mL 量瓶中，加入乙腈适量，超声使溶解，用乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液; 精密量取1 mL，置于100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照溶液。

　　分别取吲哚美辛杂质A、吲哚美辛杂质B 和吲哚美辛杂质I对照品各适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成每1 mL 中各约含0.8 μg 的溶液，作为对照品溶液。按照HPLC 法( 通则0512) 试验。

　　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 以乙腈为流动相A，0 .005 mol·L-1磷酸二氢钾溶液( 用磷酸调节pH 值至2.5) 为流动相B，按表1 进行梯度洗脱; 检测波长为238 nm。

　　理论塔板数按吲哚美辛峰计算不低于2 000，吲哚美辛峰与相邻杂质峰，吲哚美辛杂质A、吲哚美辛杂质B与吲哚美辛杂质I 峰分离度均应符合要求。

　　精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。

　　供试品溶液中如有杂质峰，按外标法以峰面积分别计算吲哚美辛杂质A，B 与I 的含量，均不得过吲哚美辛标示量的0.20%，其他单个杂质峰面积小于对照溶液主峰面积的0.2 倍( 0.20%) ，各杂质峰面积的和小于对照溶液主峰面积( 1.0%) 。

　　按完善提高后的有关物质标准做检验，本次抽检的106 批次吲哚美辛胶囊，有37 批次有关物质不符合规定，合格率为65.1%( 按《中华人民共和国药典》2015 年版二部检验，合格率为100%) 。

　　37 批次样品杂质I 均不符合规定，其中11 批次样品杂质J 不符合规定，5批次样品总杂质不符合规定; 本次抽检的34 批次吲哚美辛缓释胶囊，有12 批次有关物质不合格，合格率为64.7%( 按《中华人民共和国药典》2015 年版二部检验，合格率为100%) ，其中1批次杂质B 不符合规定，11 批次杂质I 不符合规定。

　　按完善提高后的有关物质标准进行检测验证，吲哚美辛胶囊此次抽样涉及的10 家生产企业，其中

　　根据破坏试验结果，吲哚美辛原料、各厂家吲哚美辛胶囊和吲哚美辛缓释胶囊在碱性条件下容易产生杂质A 和杂质B，杂质I 和J 在各条件下均较稳定; 在酸性条件下，也会不同程度地产生杂质A 和杂质B; 氧化破坏也会不同程度地产生杂质A 和杂质B，同时会产生大量其他未知杂质，总杂质增加的最多; 光照破坏和高温破坏，各杂质相对较稳定，各破坏条件下总杂质均呈增高趋势。

　　3 个原料药生产厂家提供的原料，均按色谱条件1 进行有关物质的测定，所检出杂质与其供应的制剂企业生产的制剂所检测出的杂质基本一致，但因原料药每个厂家只测定了1 个批号，代表性差，又因该3 个批号原料不一定是本次抽样样品所使用的原料批次。

　　结合破坏实验结果，我们推测制剂杂质来源主要是原料带入，但各制剂生产厂家所加辅料是否对杂质有一定的影响，还有制剂的各个工艺过程对杂质的影响也还有待进一步深入的研究。

　　吲哚美辛胶囊和缓释胶囊有关物质的风险比较大，虽然有些批次样品按完善提高的标准做检验是合格的，但还有多批次样品杂质I 接近0.20%，考虑本品的不良反应较多及各杂质的毒性预测结果，各生产企业应格外的重视与产品质量紧密关联的所有的环节，确定保证产品质量的稳定，保障用药安全。