高效液相色谱法系选用高压输液泵将规则的活动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行别离测定的色谱办法。注入的供试品,由活动相带入色谱柱内,各组分在柱内被别离,并进入检测器检测,由积分仪或数据处理系统记载和处理色谱信号。

　　高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。~,填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是习惯小粒径(约2μm)填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

　　反相色谱柱:以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等;常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

　　正相色谱柱:用硅胶填充剂,或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

　　离子交流色谱柱:用离子交流填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交流色谱柱和阴离子交流色谱柱。

　　色谱柱的内径与长度,填充剂的形状、粒径与粒径散布、孔径、外表积、键合基团的外表掩盖度、载体外表基团残留量,填充的细密与均匀程度等均影响色谱柱的功能,应根据被别离物质的性质来挑选正真合适的色谱柱。

　　温度会影响别离作用,种类正文中未指明色谱柱温度时系指室温,应留意室温改变的影响。为改进别离作用可适当进步色谱柱的温度,但一般不宜超越60℃。

　　剩余硅羟基未关闭的硅胶色谱柱,活动相pH值一般应在 2〜8之间。剩余硅羟基已关闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的活动相,合适于pH 值小于2或大于8 的活动相。

　　最常用的检测器为紫外-可见分光检测器,包含二极管阵列检测器,其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。

　　紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为挑选性检测器,其呼应值不只与被测物质的量有关,还与其结构有关;蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器,对一切物质均有呼应。结构类似的物质在蒸发光散射检测器的呼应值简直仅与被测物质的量有关。

　　紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的呼应值与被测物质的量在一些范围内呈线性联系,但蒸发光散射检测器的呼应值与被测物质的量一般呈指数联系,一般需经对数转化。

　　不同的检测器,对活动相的要求不同。紫外-可见分光检测器所用活动相应契合紫