1.称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；假如极难分，也可以用100倍量的硅胶。
2.搅成匀浆。参加干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充沛拌和。假如洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系统，就用石油醚拌；假如洗脱剂是氯仿/醇系统，就用氯仿拌。若无法搅成匀浆，阐明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，假如不与水配伍走分配色谱的话，有必要预先用无水硫酸钠久置枯燥。氯仿用无水氯化钙枯燥，以除掉1%的醇。假如样品对酸灵敏，不能用氯仿系统过柱。
3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不*海沙，参加约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，翻开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。跟着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。沉降完成后，参加更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速稳定。柱床约被紧缩至9/10体积。不管走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使别离度进步许多，且可以尽可能的避免过柱时因为柱床萎缩发生开裂。
5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，参加一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至挨近硅胶外表。然后就可以彻底放心肠参加很多洗脱剂，而不会冲坏硅胶外表。
6.过柱和搜集。十八烷基硅烷键合硅胶柱的柱层析其实就是在分散和别离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，引荐用梯度洗脱。
7.检测。要更多地运用喷显剂，假如仅用紫外灯，会丢失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8.送谱。搜集的产品旋干，在送谱前常常要重结晶。假如样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的zui后纯化手法。可除掉氢谱左右的“硅胶”峰。
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