David Liu团队提出PERT战略，为无义骤变遗传病供给一致医治计划，经过按捺性tRNA修正蛋白质中止信号。

  在传统基因医治形式中，每种骤变常常要规划一套独立的修改计划。这不只本钱高、周期长，也让稀有病患者难以获益。PERT 的方针便是打破这一约束。

  无义骤变（Nonsense Mutation）会把本应编码氨基酸的暗码子变成中止暗码子，因而导致蛋白质提早结束。这一类骤变占ClinVar数据库（NCBI录入已知致病基因变异及其科学依据的数据库）一切致病骤变的约 24%，但分布在许多不同基因中，因而难以用一种东西一致处理。

  要了解 PERT，先从细胞造蛋白的方法说起：mRNA 就像蛋白质的阐明书，而 tRNA 是转移氨基酸的小辅佐，把阐明书上的指令变成完好蛋白。阐明书里有三个特定的中止信号--UAA、UAG 和 UGA，当 tRNA 读到这些暗码子时，蛋白就中止组成。无义骤变的问题就在于这些中止信号呈现在阐明书中心，导致蛋白质提早收工，无法正常发挥作用。

  研讨团队规划出一种按捺性 tRNA，当遇到过错的中止信号时，它不会停下来，而是持续加上一个氨基酸，让蛋白质顺畅延续下去。随后，运用 prime editing 将这种 tRNA 安稳地植入细胞基因组，使细胞长时间表达这种会疏忽过错的 tRNA。

  PERT的中心主意并不是修正骤变，而是让细胞在遇到无义骤变时能够持续正常组成蛋白质。已然各个疾病的一起问题是过错中止信号，那就直接让细胞疏忽这个过错。

  尽管不同疾病触及的基因各不相同，但它们有一个一起问题：都呈现了无义骤变，也便是蛋白质组成被提早中止。PERT 正是针对这个共性问题，所以理论上，只要是这种类型的骤变，都能够用同一种方法处理，让蛋白质顺畅组成。

  为了寻觅最优 sup-tRNA 变体，研讨团队对 tRNA 基因进行饱满骤变，评价多种可被 Prime Editing 拜访的变异组合。经过构建不同抗反响区域骤变组合，团队筛选出多种具有高 readthrough 功率的工程化 sup-tRNA，蛋白产值相对野生型可达 35%以上，为不同无义骤变供给根底东西。

  装置 sup-tRNA 后，蛋白或酶活康复 17%-70%，部分 NPC1 模型的全长蛋白表达也得到部分康复。大部分 mRNA 在无义骤变方位得以安稳，阐明 PERT 能够有用战胜NMD （Nonsense-Mediated Decay，无义骤变介导的 mRNA 降解）对转录本的影响。

  为了查验 PERT 的实际作用，研讨团队在几种由无义骤变引起的遗传病细胞模型中进行了测验，这中心还包含 Batten 病、Tay-Sachs 病和 Niemann-Pick C1 型病。在六个 HEK293T 疾病模型中装置工程化 sup-tRNA 后，修改功率到达 56%-84%，终究能够康复 TPP1、HEXA、NPC1 蛋白或酶活，并到达甚至有超越已知的医治阈值。

  在 in vivo 试验中，团队运用 AAV9将 Prime Editing 体系和 sup-tRNA 引进重生小鼠脑内。经过 GFP 陈述体系评价 readthrough 功率，承受修改的细胞中 GFP 蛋白相对产值到达 24%-26%，证明装置的 sup-tRNA 在动物体内能够生成功用性蛋白。随后，在 Hurler 综合征（MPS-I，小鼠 IduaW392X 模型）试验中，PERT 在受损安排中康复约 6% 的 IDUA（α-L-iduronidase，溶酶体酶）酶活，病理体现简直消失。脑、肝、脾及心脏安排的病理剖析显现，未处理小鼠的泡沫细胞累积、Purkinje 细胞空泡化及 GAG（glycosaminoglycan，糖胺聚糖）沉积在 PERT 处理组中得到显着改进或消失，标明部分蛋白功用康复即可带来显着医治作用。

  总的来看，PERT 经过将内源性 tRNA 基因转化为 sup-tRNA，完成了一套修改战略掩盖多种无义骤变相关疾病，结合 prime editing 的一次性持久性，展现出跨疾病、潜在一次医治，多病获益的优势。细胞和动物模型试验均显现 PERT 可康复功用性蛋白或酶活，一起未发现显着毒性或脱靶效应，为将来临床使用奠定了根底。

  未来，PERT可与安排特异性病毒或纳米颗粒载体结合，完成针对不一样器官的精准医治，或与小分子药物联合，进步 readthrough 功率，为更多遗传病患者供给新的医治期望。