：别嘌醇及其代谢产物氧嘌呤醇均能抑制黄嘌呤氧化酶，阻止次黄嘌呤和黄嘌呤代谢为尿酸，由此减少了尿酸的生成。使血和尿中的尿酸含量降低到溶解度以下水平，防止尿酸形成结晶沉积在关节及其他组织内，也有助于痛风病人组织内的尿酸结晶重新溶解。本品适用于原发性和继发性高尿酸血症，尤其是尿酸生成过多而引起的高尿酸血症；反复发作或慢性痛风者；痛风石；尿酸性肾结石和(或)尿酸性肾病；有肾功能不全的高尿酸血症。本品可引起皮疹、白细胞及血小板减少等不良反应。别嘌醇片(0.1g规格)口服后24小时血尿酸浓度就开始下降，而在2～4周时下降最明显。急性毒性试验结果：大鼠经口LD50为6000mg/kg，腹腔注射LD50为750mg/kg；小鼠经口LD50为700mg/kg，腹腔注射LD50为160mg/kg。口服后在胃肠道内吸收完全，2～6小时血药浓度可达峰值，在肝脏内代谢为有活性的氧嘌呤醇，两者都不能和血浆蛋白结合。本品的半衰期为14～28小时，与氧嘌呤醇均由肾脏排出。并用促尿酸排泄药可促进氧嘌呤醇的排泄，但肾功能不全时其排出量减少。目前，别嘌醇原料及制剂含量、有关物质检查多采用苯基硅烷键合硅胶(苯基柱)为填充剂的测定方法。这类检测的新方法在测定过程中存在系统稳定性不高、杂质分离度偏低等问题。鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的目的是提供一种别嘌醇中有关物质的检测的新方法，该检测的新方法稳定性较高，分离度较高，可以有明显效果地地分离别嘌醇中的有关物质。本发明的另一目的是提供一种检测别嘌醇含量的检测的新方法，该检测的新方法稳定性较高，分离度较高，可以有明显效果地地测定别嘌醇含量。本发明是这样实现的：一种别嘌醇中有关物质的检测的新方法，其包括如下步骤：步骤a：取待测别嘌醇样品，用甲醇溶解，制得供试品溶液；步骤b：将供试品溶液溶液注入色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：甲醇-磷酸盐溶液为流动相A，乙腈为流动相B；检测波长：235-245nm；洗脱方式：梯度洗脱或等度洗脱。进一步地，在本发明的一些实施方案中，磷酸盐溶液为磷酸铵溶液。进一步地，在本发明的一些实施方案中，磷酸铵溶液为质量百分比为0.1-0.3％的磷酸铵溶液。优选地，在本发明的一些实施方案中，磷酸铵溶液为质量百分比为0.2％的磷酸铵溶液。进一步地，在本发明的一些实施方案中，磷酸铵溶液的pH为5.0-5.5。优选地，在本发明的一些实施方案中，磷酸铵溶液的pH为5.3。进一步地，在本发明的一些实施方案中，流动相A中甲醇与磷酸盐溶液的体积比为(45-55):(45-55)。优选地，在本发明的一些实施方案中，流动相A中甲醇与磷酸盐溶液的体积比为50:50。进一步地，在本发明的一些实施方案中，梯度洗脱的程序为：0-5min，流动相A70％，流动相B30％；在5-40min，流动相A50％，流动相B50％；在40-48min，流动相A20％，流动相B80％；在48-49min，流动相A20％，流动相B80％；在49-60min，流动相A70％，流动相B30％。进一步地，在本发明的一些实施方案中，当洗脱方式选用等度洗脱时，流动相A与流动相B的体积比为40:60。进一步地，在本发明的一些实施方案中，色谱条件的流速为0.8～1.2ml/min。进一步地，在本发明的一些实施方案中，色谱条件的进样量为18-22μl。进一步地，在本发明的一些实施方案中，步骤a中，取别嘌醇样品，用85％-100％甲醇溶解，稀释制成每1ml中含1.8-2.2mg别嘌醇样品的供试品溶液。一种检测别嘌醇含量的检测的新方法，其包括如上所述的别嘌醇中有关物质的检测的新方法。进一步地，在本发明的一些实施方案中，步骤a中，取别嘌醇样品，用85％-100％甲醇溶解，稀释制成每1ml中含0.18-0.22mg别嘌醇样品的供试品溶液。本发明具有以下有益效果：本发明提供的别嘌醇中有关物质的检测的新方法，其采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，并以甲醇-磷酸盐溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱或等度洗脱方式；该检测的新方法可以将待测别嘌醇样品中的别嘌醇和其他有关物质即杂质有效分离检测出来，可操作性强，检测方法专属性强、准确性和灵敏度高、适应性强，为保证药品安全、有效、可控提供了依据。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本发明实施例1中的现行标准杂质定位图(图中：1代表别嘌醇峰，2代表杂质峰)；图2为本发明实施例1中的采用本发明提供的检测方法的杂质定位图(图中：1代表别嘌醇峰，2代表杂质峰)；图3为本发明实施例1中的高温破坏色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图4为本发明实施例1中的酸破坏色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图5为本发明实施例1中的碱破坏色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图6为本发明实施例1中的氧化破坏色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图7为本发明实施例1中的光照破坏色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图8为本发明实施例1中的检测限色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图9为本发明实施例2中的别嘌醇中有关物质的检测色谱图(图中：1代表别嘌醇峰)；图10为本发明实施例3中的别嘌醇含量的检测色谱图(图中：A代表对照品的检测色谱图，B代表待测样品的检测色谱图)。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例11杂质定位取待测样品别嘌醇(批号：170601；来源：南京康舟医药科技有限公司自制)适量，加溶剂溶解并稀释制成浓度为2mg/ml的溶液，另取别嘌醇峰鉴别对照品(批号：161203；来源：南京康舟医药科技有限公司自制适量，加稀释液制成每lml中分别约含别嘌醇峰鉴别对照品0.2mg的溶液，并于光照射20min，作为系统适用性溶液，取20μl注入色谱仪(ShimadzuLC20AT高效液相色谱仪)，记录色谱图。色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(KromasilC18)，规格：5μm，250×4.6mm；流动相：甲醇-0.2％磷酸铵溶液(50:50)为流动相A，乙腈为流动相B；流速：1.0ml/min；检测波长：UV238nm；进样量：20μl；洗脱方式：梯度洗脱；洗脱程序：时间(min)A相B相7030结果如图1和图2所示。杂质峰2与主峰1别嘌醇分离度大于2.5，别嘌醇理论塔板数大于10000。图1为采用现有的方法的检测色谱图，该方法中检出杂质较少(仅检出4个杂质)，别嘌醇理论塔板数4386，别嘌醇与杂质2的分离度3.202，杂质2与后一峰分离度仅1.120；而图2为采用了本发明提供的检测方法的色谱图，别嘌醇理论塔板数13236，别嘌醇与杂质2的分离度为4.277，杂质1与后一峰分离度3.573，本发明提供的检测方法中所有杂质均可体现，共检出10个杂质。根据该结果，有理由认为本发明提供的检测方法更为适合别嘌醇有关物质的检查，可更有效的检测杂质，符合人民用药的要求。2破坏性试验取待测样品适量(约20mg)，置10ml量瓶中，分别加入1mol/LHCl、1mol/LNaOH、3％H2O2、105℃加热5Hr及光照20min进行破坏，采用上述色谱条件，取各溶液注入色谱仪检测，记录色谱图，结果如图3-图7所示。上述结果表明，在此本发明提供的色谱条件下，破坏后的样品中其他组分与主峰均可达到基线检测限取别嘌醇对照品(批号：170501；来源：南京康舟医药科技有限公司自制)适量，加溶剂溶解并稀释制成浓度0.53ug/ml时后，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，直至主峰峰高为基线所示，测得最低检出量约为10.6ng，由此说明本发明提供的色谱条件具有较高的灵敏度。实施例2本实施例提供的别嘌醇中有关物质的检测方法，具体如下：取别嘌醇样品(批号：170601；来源：南京康舟医药科技有限公司自制)适量，加溶剂配制成每1ml中约含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为0.5％自身对照溶液。取0.5％自身对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。加校正因子的自身对照法以峰面积计算，得到样品中杂质量；其中，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(KromasilC18)，规格：5μm，250×4.6mm；流动相：甲醇-0.2％磷酸铵溶液(50:50)为流动相A，乙腈为流动相B；流速：1.0ml/min；检测波长：UV238nm；进样量：20μl；洗脱方式：梯度洗脱；洗脱程序：时间(min)A相B相7030结果如图9所示。采用加校正因子的自身对照法以峰面积计算，可得到样品中杂质含量，别嘌醇理论塔板数13100，样品中未检出杂质2，共检出5个杂质，杂质总和为0.22％。实施例3本实施例提供了别嘌醇含量的检测方法，具体如下：取待测别嘌醇样品(批号：170601；来源：南京康舟医药科技有限公司自制)适量，加溶剂配制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；精密称取别嘌醇对照品(批号：170501；来源：南京康舟医药科技有限公司自制)适量，同法配制，作为对照溶液。取精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(KromasilC18)，规格：5μm，250×4.6mm；流动相：甲醇-0.2％磷酸铵溶液(50:50)为流动相A，乙腈为流动相B，流动相A：流动相B＝40：60；流速：1.0ml/min；检测波长：UV238nm；进样量：20μl；洗脱方式：等度洗脱；结果如图10所示，对照品与样品保留时间一致，采用外标法以峰面积计算，得到样品中别嘌醇含量为99.35％(以干燥品计)。实验例1采用现行的检测方法进行检测，简要描述如下：以苯基硅烷键合硅胶(苯基柱)为填充剂；流动相A为0.2％磷酸液，流动相B为0.2％磷酸乙腈，进行梯度洗脱，检测波长为238nm。取别嘌醇峰鉴别对照品适量，加稀释液制成每lml中分别约含别嘌醇峰鉴别对照品0.2mg的溶液，并于光照射20min，作为系统适用性溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。结果如图1所示，基线波动大，杂质峰虽然与主峰完全分离，但杂质峰之间无法完全分离，而且检出杂质较少，无法准确测定杂质的量。综上，本发明提供的别嘌醇含量以及别嘌醇中有关物质的检测方法，其采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，并以甲醇-磷酸盐溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱方式；该检测办法能够将待测别嘌醇样品中的别嘌醇和其他有关物质即杂质有效分离检测出来，可操作性强，检测的新方法专属性强、准确性和灵敏度较高、适应能力强，为保证药品安全、有效、可控提供了依据。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围以内。当前第1页123

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