运用键合固定相色谱柱应留意的问题
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运用键合固定相色谱柱应留意的问题

2025-02-27 23:21:43 技术知识

  一般正相键合相的稳定性要低于反相键合相,反相键合硅胶的稳定性与运用活动相的pH值相关,一般水溶液的pH应保持在2-8之间,pH8.5会引起基体硅胶的溶解。为处理这一问题,多个品牌色谱柱供货商专门开发了能在高pH条件下运用的硅胶色谱柱,这种硅胶基质大都以杂化为主,机械强度要远高于一般硅胶,功能优越,耐酸、耐碱、耐高温。

  硅胶中的残留硅醇基会对色谱别离发生不良影响,经常会形成峰型差、拖尾,各个品牌商也是八仙过海各显神通,对硅羟基进行各种润饰,衍生出系列的柱子,这种柱子稳定性要优于一般的柱子,运用作用更好。

  剖析办法开发时,色谱柱很重要的一个功能,便是色谱别离行为的重现性,包含方针峰的保存时刻、理论塔板数、半峰宽等;商业化的色谱柱更重视这一点,色谱柱重现性是否优异,直接影响到色谱柱运用者对色谱柱的点评,当然也有不靠谱的供货商,本人在运用某品牌柱子时,相同批次间色谱柱重现性较好,不同批次间的色谱柱会有多多少少的差异,比方保存时刻、柱效等。

  柱子的选择性因为许多原因显得很重要,不同品牌柱子石英砂的取样地址不同,导致硅胶基质不一致,加上后续色谱柱填料工艺的差异(含碳量不同),即便相同类型的色谱柱,在相同的色谱条件下,对某些物质的保存及功能也会有一些不同,例如咱们在进行一原料药办法开发时,经过替换两款不同牌子的ODS(十八烷基键合硅胶)色谱柱进行耐用性调查,呈现开始物料与中间体出峰次序不一致的状况,跟供货商交流后,确认这两款柱子都是最一般的ODS色谱柱(硅羟基与C18烷基链键合,硅胶未进行任何润饰),出峰次序原因只能归结到砂子或含碳量不同。

  办法树立期间有必要改组柱子来进步选择性和添加别离度,为实践查验测验柱子的运用供给数据支撑。

  运用键合相色谱柱时,因为很多极性或非极性样品的接连注入,会引起固定相对样品的吸附、缔合等不良效应,使柱别离功能变差,引起峰形加宽或拖尾等现象,此刻应及时对色谱柱进行再生处理。对正相键合柱可用1:1甲醇氯仿活动相来进行再生,对反相键合柱可用甲醇活动相再生,若作用欠好,可运用丙酮、二甲基甲酰胺或约0.01mol/L无机酸水溶液进行再生。

  总归要做好办法开发,对色谱柱的保护必不可少,会延伸色谱柱的惯例运用的寿数下降运转本钱。