① 十八烷基:即为键合相,除了十八烷基,还有辛烷基,丁烷基,苯基,氟苯基等;
② 硅烷键合:即为键和办法,一般键合相是经过硅烷化试剂与硅胶外表的硅醇基发生化学反响而键合上去,因而会称为硅烷键合;
上文中的十八烷基即指键合相,是硅烷化试剂与填料孔内的硅羟基反响发生的。除此之外,依据不同别离机理,可所以不同的键合相:
●HILIC(亲水保存作用机理):典型如氨基(氨丙基)、Amide(酰胺基)。
①对选择性影响最大的是别离机理。例如,同归于反相剖析的C18与C8之间的选择性距离,远不如HILIC形式下用Amide所得到的选择性距离。
②假如样品很杂乱,用不同键合相的色谱柱、甚至不同别离机理来做多元化的剖析。关于极性规模很广大的样品,可优先考虑反相与HILIC办法相结合进行剖析。
③即便是我们最了解的C18键合相,由于键合办法与填料基质的不同,选择性也或许有较大差异,需求留心比较。
机理不一起(反相 vs HILIC),色谱柱选择性距离最大;而即便都是C18柱,由于详细性质不同,部分的选择性细节也有所不同。
键合相与硅羟基反响时,可经过单键、双键或三键办法键合,色谱柱在低pH条件下常常运用时单键键合的键合相易丢失,色谱图上表现为保存时刻缩短;三键键合的键合相在低pH条件下的耐用性更佳。
现在渐渐的变多的剖析是在LCMS上进行。所谓的“LCMS兼容色谱柱”,便是要求色谱柱的键合相满足结实,不然,键合相的丢失会形成MS噪音,导致剖析灵敏度下降。当键合相是苯基、PFP等有紫外吸收的官能团时,在LC紫外检测器上还能看到因键合相丢失而洗脱出的键合相本底峰。
由于结构位阻,孔外表的硅羟基无法彻底与烷基化试剂反响,而残留硅羟基的存在,或许会引起碱性化合物峰形欠安,因而常选用体积较小的TMS(三甲基硅烷)或其他专利技术进行封端,使填料外表尽或许的削减残留硅醇基。例如,下图展现了色谱填料是否封端对剖析物别离作用的影响,可以正常的看到,只要碱性药物(4)和(7)的峰形会遭到显着影响。
现在也有一些色谱柱,在保证填料基质纯度满足高的前提下,自动不封端,例如HSS C18 SB,在药物剖析中可提供不同的选择性,有其共同的优势。如下图中,在检测某普利类药物时,HSS C18 SB表现出显着不同的选择性,可获得更好的峰形及别离度。