[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶手性纯度的分析方法。

  [0002] (R)-3_氨基哌啶是Π 型糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀的重要中间体。利拉利汀 是德国勃林格殷格翰制药公司2011年上市的口服降糖药。阿格列汀是由日本武田制药公司 开发的DPP-IV抑制剂，于2013年1月获美国FDA批准上市。利拉利汀、阿格列汀分子结构中只 有一个手性中心，由中间体(R)-3_氨基哌啶引入，因此(R)-3-氨基哌啶的光学纯度直接决 定了利拉利汀、阿格列汀的光学纯度和药效。制备高标准、高光学纯度的(R) -3-氨基哌啶， 对于合成新药利拉利汀、阿格列汀具备极其重大理论意义与实际意义。

  [0004] 相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定能力。但由于3-氨基哌 啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，通常采 用衍生化方法使之紫外吸收增强来提升检测灵敏度。而通过与手性试剂进行衍生化，得 到具有三个手性基团的衍生物，能够直接在反相柱上进行异构体的分析。

  [0005] 本发明的目的是克服现存技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶3-氨基哌啶手性纯 度的分析方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

  [0006] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下： 一种3-氨基哌啶手性纯度的分析方法，具体包含如下步骤： 步骤一、衍生化 将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-( + )_l-苯基乙磺酰氯为 衍生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)_( + )-1 -苯基乙磺酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得 到衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I; 步骤 、：7T5MiiWJ

  采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映 体过量率测定。

  [0007] 所述的有机溶剂选自庚烷、己烷、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿和四氯化碳中的 一种或两种以上的组合。

  [0008] 所述的有机溶剂与3-氨基哌啶的体积比为0.5~300:1，优选的体积比范围为2~20: 1〇

  [0010] 本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关，本领域技术人能根据溶 剂的选择清楚的确定回流温度的范围。

  [0013] 所述的反相高效液相色谱选自十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱、辛烷基 硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱或者苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，优选十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

  [0014] 所述的反相高效液相色谱的流动相由水和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙 醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种;有机溶剂占流动相的体积比例范围为40%~90%，优选的 范围为60%~80%。

  [0015]所述的流动相中还添加有表面活性剂，所述表面活性剂选自二乙胺、三乙胺、季铵 盐、磺酸盐。

  [0018]所述衍生化后的3-氨基哌啶在反相高效液相色镨的进样浓度为0.005~5mg/mL，优 选的浓度为〇. 1~lmg/mL。

  [0019] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为:Agilent C18色谱柱，流动相为甲 醇-水(体积比为30:70)，紫外检测波长为254]11]1，流速为1.〇1]11711^11，柱温为30°(：，进样体积 20yL〇

  [0020] 与现存技术相比，本发明所取得的有益效果如下： 本发明给出了 3-氨基哌啶的衍生化方法，通过对(R)-( + )_l-苯基乙磺酰氯和3-氨基哌 啶衍生物进行手性纯度分析，以此来实现对3-氨基哌啶的手性纯度分析。经过控制反应条件， 快速生成(R)-(+)_l-苯基乙磺酰氯和3-氨基哌啶的衍生物，建立了对(R)-(+)-1-苯基乙磺 酰氯和3-氨基哌啶衍生物手性纯度的高效液相色谱分析方法。该方法简单易操作、重现性好、 灵敏度较高、准确性强，便于标准化操作。为糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀进一步深入研发 创造了不可或缺的条件。

  [0024]将（R)-( + )_l-苯基乙磺酰氯与（R)-3-氨基哌啶衍生物用流动相溶解，浓度为 0.05mg/mL，采用高效液相色谱进行仔细的检测分析。液相色谱条件:Agilent C18色谱柱，流动相 为甲醇-水(体积比为70:30)，紫外检测波长为254腦，流速为1.〇1]11711^11，柱温为30°(：，进样 体积20yL，保留时间和手性纯度分析见表1，其图谱见图1。

  [0026]将（R)-( + )_l-苯基乙磺酰氯与（RS)-3-氨基哌啶衍生物用流动相溶解，浓度为 0.05mg/mL，采用高效液相色谱进行仔细的检测分析。液相色谱条件:Agilent C18色谱柱，流动相 为甲醇-水(体积比为70:30)，紫外检测波长为254腦，流速为1.〇1]11711^11，柱温为30°(：，进样 体积20yL，保留时间和手性纯度分析见表1，其图谱见图2。

  [0028]将（R)-( + )_l-苯基乙磺酰氯与（RS)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解，浓度为 0.05mg/mL，采用高效液相色谱进行仔细的检测分析。液相色谱条件:Agilent C18色谱柱，流动相 为甲醇-水(体积比为70:30)，紫外检测波长为254腦，流速为1.〇1]11711^11，柱温为30°(：，进样 体积20yL，保留时间和手性e. e. %值同实施例1 -2。

  [0030] 将（R)-( + )-1-苯基乙磺酰氯与（RS)-3-氨基哌啶衍生物用

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